Трихомонадные поражения (диагностика)

11.05.2010г.

Диагностика основывается на непосредственном обнаружении возбудителей в мазках и (или) посевах. У мужчин микроскопируют не свободно стекающие выделения, а соскобы или смывы из уретры, секрет половых желез (секрет простаты, эякулят) и осадок свежевыпущенной мочи, у женщин — выделения из канала шейки матки, уретры и задней части свода влагалища. У девочек получают материал из влагалища. 

Микроскопируют как нативные (в висячей или в раздавленной капле), так и окрашенные препараты. Посевы проводятся на специальные питательные среды. Но так как ни один из методов не обеспечивает во всех случаях выявления возбудителей, то исследование необходимо проводить несколько раз, сочетая по возможности микроскопию с посевами. 

В сыворотке крови больных трихомониазом имеются агглютинирующие, комплементсвязывающие и иммунофлюоресцирующие антитела, но серологическая диагностика трихомониаза стала возможной только при использовании иммунофлюоресцентного метода. 

Ускоренная методика постановки РИФ-40 с сывороткой крови, обладающая высокой чувствительностью и специфичностью, разработана В. Н. Бедновой и С. Л. Зильман. Используют антиген, приготовленный из 20 — 30 штаммов влагалищных трихомонад, выращенных в течение 2 — 3 сут на жидкой среде CPLM

После 2-кратной отмывки трихомонад с помощью центрифугирования изотоническим раствором натрия хлорида их обрабатывают 10 % раствором нейтрального формалина при комнатной температуре в течение 20 мин. Затем трихомонады вновь отмывают изотоническим раствором натрия хлорида, и взвесь сохраняют в холодильнике при температуре 4 °С. Для изготовления препаратов используют эту взвесь с тем, чтобы в каждом из нативных препаратов было 5 — 10 трихомонад в поле зрения.

Методика постановки реакции:
на хорошо вымытые и тщательно обезжиренные предметные стекла наносят каплю антигена и тщательно распределяют ее по стеклу. Стекла сушат на воздухе, затем фиксируют над пламенем спиртовки. 

Приготовленные таким образом препараты могут сохраняться в холодильнике до 4 мес, а при комнатной температуре — в течение 5 — 7 дней. Возможна и пересылка препаратов для постановки реакции в других лабораториях. Инактивированную испытуемую сыворотку крови перед исследованием разводят в отношении 1:40 бессолевым мясо-пептонным бульоном (рН 7,0).

Его готовят из говяжьего мяса при повышенном содержании пептона (1,5%), разведенного перед постановкой реакции в 3 раза дистиллированной водой. Сыворотку помещают в термостат при температуре 37 °С для абсорбции на 30 мин. Стекла с нанесенным на них антигеном монтируют в стеклодержателе, который затем помещают во влажную камеру. 

На препараты наносят абсорбированную сыворотку крови. Влажную камеру помещают в термостат при температуре 60 °С на 10 мин, после чего препараты промывают в двух порциях фосфатного буфера (рН 7,2) и высушивают при температуре 60 °С в течение 5 мин. Затем препараты обрабатывают люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека, разведенной по титру, помещают во влажную камеру и выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 30 мин. 

После этого препараты вновь промывают, высушивают и окрашивают водорастворимым бромфеноловым синим (индикатор — аммониевая соль тетра-бромфенолсульфофталеина) в разведении 1:50 в течение 20 мин при комнатной температуре, после чего их снова промывают и сушат. На высушенные препараты наносят забуференный глицерин, их монтируют и микроскопируют в люминесцентном микроскопе с ртутнокварцевой лампой ДРШ-250

При приготовлении раствора бромфенолового синего 0,1 г краски разводят в 5 мл дистиллированной воды, и к этому раствору добавляют 0,5 мл спирта, тщательно перемешивают. Для окраски препаратов берут основной раствор, цельный или разведенный в 2 раза дистиллированной водой. 

По данным В. Н. Бедновой и соавт. (1981), ускоренная РИФ-40 в качестве отборочного теста может быть использована для более качественного выявления трихомониаза у беременных и лиц, проходящих профосмотр. Высокий уровень трихомонадных поражений мочеполовых органов (по материалам ВОЗ, трихомониазом страдают 10 % населения земного шара) указывает на необходимость повышения качества диагностики этой патологии. 

Как отмечают М. В. Яцуха и соавт. (1982), этому способствует использование жидкой питательной среды СКДС, содержащей 100 мл солевого раствора, 10 мл 20% водного раствора мальтозы, 10 мл гидролизата казеина, 10 мл дрожжевого аутолизата, 30 мл сыворотки крови крупного рогатого скота. 

При культуральных исследованиях в лабораториях кожно-венерологических диспансеров среда СКДС резко повышает уровень диагностики трихомониаза по сравнению с таковым при микроскопии мазков, окрашенных метиленовым синим и по Граму: было выявлено дополнительно 51,4 % больных трихомониазом.

«Болезни передающиеся при половых контактах»,
Ю.К.Скрипкин





Читайте далее: