Определение белка в блюдах (ход определения)

23.09.2010г.

В колбу Кьельдаля вместимостью 500 см3 помещают навеску гомогенизированного блюда (или навеску сухого вещества) из расчета содержания азота в пробе 20 — 25 мг. Затем постепенно по стенкам добавляют 20 см3 концентрированной серной кислоты. 

В колбу вносят катализатор из расчета 0,6 г на 1 см3 серной кислоты и несколько стеклянных бусинок, закрывают ее грушевидной стеклянной пробкой, осторожно круговыми движениями перемешивают содержимое и ставят на нагревательный прибор под углом 40°. Нагревают осторожно. 

При образовании пены колбу следует снять с нагревательного прибора и дать пене осесть, добавив по каплям этанол, а затем продолжают нагревание, следя за тем, чтобы пена не попала в горло колбы. После прекращения пенообразования нагрев усиливают (кипящая кислота должна конденсироваться не выше средней части горлышка колбы). Нагревание продолжают до окончания минерализации, пока жидкость не станет прозрачной, зеленовато-голубого цвета (от сульфата меди). 

Затем содержимое колбы охлаждают, добавляют 150 см3 дистиллированной воды и соединяют с аппаратом для отгонки аммиака (с водяным паром). Далее в колбу через делительную воронку прибора приливают 80 см3 33% раствора гидроксида натрия, закрывают кран делительной воронки во избежание потерь аммиака. 

Для отгонки аммиака в коническую колбу вместимостью 250 см3 отмеривают 50 см3 раствора борной кислоты, добавляют 4 капли индикатора, перемешивают и ставят под аллонж, соединенный с холодильником так, чтобы конец аллонжа был погружен в кислоту. 

Содержимое колбы нагревают до кипения, избегая пенообразования. Продолжают перегонку до тех пор, пока жидкость не станет вскипать толчками. Нагрев регулируют таким образом, чтобы продолжительность перегонки была не менее 20 мин. Окраска раствора борной кислоты не должна изменяться. 

Перед окончанием перегонки опускают коническую колбу так, чтобы конец аллонжа оказался над поверхностью раствора борной кислоты и продолжают перегонку еще 1 — 2 мин. Затем нагревание прекращают и отсоединяют аллонж. 

В коническую колбу смывают небольшими порциями дистиллированной воды остатки раствора борной кислоты с внутренней и внешней поверхностей аллонжа. Дистиллят титруют раствором серной кислоты до перехода зеленого цвета в фиолетовый. Параллельно проводят контрольный опыт, добавив в колбу Кьельдаля вместо навески 5 см3 дистиллированной воды. 

Содержание белка в 1 г гомогенизированной навески определяют по формуле (в граммах): 

Формула

где: 0,0014 — содержание азота, эквивалентное 1 см 0,05 моль/дм3 раствора серной кислоты, мг; К — поправочный коэффициент 0,05 моль/дм3 раствора серной кислоты; V1 — объем 0,05 моль/дм3 раствора серной кислоты, израсходованный на титрование дистиллята рабочего раствора, см3; V0 — объем 0,05 моль/дм3 раствора серной кислоты, израсходованный на титрование дистиллята в контрольном .опыте, см3; 6,25 — коэффициент для пересчета азота на белок; М — масса навески, г.

«Руководство к практическим занятиям по методам
санитарно-гигиенических исследований», Л.Г.Подунова





Читайте далее: