В качестве антигена используют взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса из 7-суточного орхита кролика.
Получение и хранение антигена требует соблюдения условий стерильности, так как с одним и тем же антигеном реакция ставится в течение длительного времени. (Антиген может быть получен в ампулах из ближайшей лаборатории, где ставят РИФ). Перед каждой постановкой реакции взвесь хорошо перемешивают и исследуют в темном поле зрения для определения ее густоты.
Для РИФ необходимо иметь 40 — 60 трепонем в темном поле зрения, и, если взвесь более густая, то ее разводят изотоническим раствором натрия хлорида, рН 7,2. Разводить надо только то количество антигена, которое необходимо для постановки реакции. Антивидовая флюоресцирующая сыворотка.
В реакции необходима меченная флюорохромом сыворотка крови животных, иммунизированных сывороточным белком человека. Лиофильно высушенную флюоресцирующую сыворотку растворяют при соблюдении условий стерильности в дистиллированной воде, в том объеме, который указан на этикетке ампул, переливают в стерильную пробирку с корковой или резиновой пробкой и в процессе использования хранят в холодильнике при температуре — 4 °С. В день постановки реакции нужное количество сыворотки разводят по титру дистиллированной водой.
Титр каждой серии необходимо определять. Для этого берут 5 сывороток крови больных сифилисом и 5 сывороток здоровых людей, разводят их изотоническим раствором натрия хлорида в 200 раз и ставят реакцию с использованием во второй фазе различных разведений флюоресцирующей сыворотки против сывороточных глобулинов человека той серии, титр которой определяется.
Окончательным титром можно считать тот, который проверен на 100 исследуемых сыворотках, из которых не менее 20 должно быть от больных сифилисом.
«Болезни передающиеся при половых контактах»,
Ю.К.Скрипкин