Информативность СЭМ
Информативность СЭМ заставляет более подробно остановиться на некоторых технических аспектах, знакомство с которыми облегчает практическую работу.
Для удобства описания все методы СЭМ, которые могут быть использованы для изучения лимфатической системы, предложено в зависимости от применяемой техники делить на три группы [Караганов Я. Л. и др., 1980]:
- СЭМ коррозионных препаратов;
- СЭМ клеточных поверхностей и неклеточных структур;
- СЭМ внутриклеточных структур.
СЭМ коррозионных препаратов
Останавливаясь на СЭМ коррозионных препаратов, заметим, что существенный прогресс в изучении кровеносных и лимфатических сосудов был связан с использованием синтетических инъекционных масс низкой вязкости, пригодных для получения и анализа в растровом электронном микроскопе полных и достаточно детальных отпечатков — реплик [Murakami Т., 1971; Kobayashi S. et al., 1976; Magari S. et al., 1978].
Инъекционные массы, применяемые для изготовления коррозионных препаратов, должны целиком заполнять исследуемые сосуды, полимеризоваться без сморщивания, усадки и разрушения тканей, противостоять действию щелочей, кислот и электронного пучка. Оказалось, что этим требованиям в той или иной мере отвечают ряд веществ, например, предполимеризованный метилметакрилат, смеси латексов, некоторые акриловые смолы.
Хорошие результаты дают коммерческие смолы «Mercox CL-2B» (фирма «Oken Shoji Со Ltd», Япония) и «Batson № 17» (фирма «Polyscience», США). Состав этих смол засекречен. Как показывает наш опыт, превосходных результатов можно достигнуть, используя отечественные смолы: предполимеризованный метилметакрилат (ММА), ТГМ-3, ПН-8 [Караганов Я. Л. и др., 1979; Миронов А. А. и др., 1979]. Это согласуется с результатами многолетних наблюдений В. Gannon (1978, 1979), который также предпочитает применять предполимер ММА. Принимая во внимание эти данные, приводим процедуру приготовления предполимеризованного ММА [Караганов Я. Л. и др., 1981].
Вначале коммерческий ММА очищают от гидрохинона путем 6-кратного встряхивания одинаковых объемов мономера с 3% раствором едкого натра в делительной воронке. Мономер отмывают от щелочи дистиллированной водой до исчезновения щелочной реакции и высушивают над прокаленным хлоридом кальция.
Затем к ММА добавляют 1% сухой перекиси бензоила и смесь нагревают в водяной бане до 87 °С. Как только вязкость ММА достигает 15—20% вязкости глицерина, смесь быстро охлаждают1. Готовый предполимер хранят в холодильнике, однако через 2—3 нед его вязкость постепенно возрастает.
1 Gannon В. (1979) предлагает предполимеризовать ММА с помощью ультрафиолетового облучения.
«Микролимфология», В.В.Купирянов, Ю.И. Бородин
Читайте далее:
