Метод получения культур животных клеток из одной клетки
Клетки, выращиваемые в таких культурах, выделяют из различных тканей животных; однако в процессе культивирования они обычно адаптируются к окружающим условиям и утрачивают свойства, присущие им в исходной ткани. Поэтому они не годятся для изучения типичной дифференцировки. В данном случае следовало разработать метод выращивания клонов из свежевыделенных эмбриональных клеток. С этой целью мы предприняли ряд экспериментов.
Прежде всего необходимо было выяснить, будет ли вообще происходить дифференцировка в условиях подобных экспериментов.
Способы выделения клеток из ткани животного
Клетки можно выделить из ткани животного с помощью контролируемой обработки ферментом. Эта обработка сама по себе не мешает дифференцировке, если только клетки имеют затем возможность вновь образовать компактную массу. Вот мы и поставили перед собой такой вопрос: будут ли клетки, выделенные этим методом, способны к дифференцировке, если их не выращивать в компактной массе, а размазать по поверхности стекла?
Для того чтобы выяснить этот вопрос, мы брали клетки скелетных мышц (то есть мышц, осуществляющих произвольные движения); специфические признаки таких клеток легко выявить с помощью микроскопических и биохимических методов. Клеточные суспензии мы готовили из развивающейся мышцы задней конечности, выделенной из 12-дневного куриного зародыша (смотрите рисунок ниже).
Выделение клеток
Выделение клеток начинается с извлечения куриного зародыша из яйца (1). Мышечную ткань срезают с кости (2) и измельчают («3). Измельченную ткань, суспендированную в разбавленном растворе фермента трипсина, переносят пипеткой в небольшую колбу (4), где после непродолжительной инкубации клетки отделяются друг от друга. Раствор затем помещают в пробирки (б, а) и центрифугируют, в результате чего клетки оседают на дно (5, б). Далее клетки вновь суспендируют в жидкой среде, подсчитывают и переносят на чашки Петри (6).
Затем с помощью пипетки мы вносили одинаковые количества клеток в чашки Петри с жидкой питательной средой. При этом клетки по отдельности оседают на дно чашки и прикрепляются к стеклу. Инкубируемые при температуре тела, клетки размножаются и за 3—4 дня дают популяцию, столь многочисленную, что образуется непрерывный слой толщиной в одну клетку, полностью покрывающий дно чашки.
«Молекулы и клетки», под ред. Г.М.Франка
Читайте далее:
