Главная / Молекулы и клетки / Гибридные нуклеиновые кислоты / Результат эксперимента изучения РНК с помощью радиоактивных изотопов

Результат эксперимента изучения РНК с помощью радиоактивных изотопов

30.05.2010г.

Смотрите - Изучение РНК с помощью радиоактивных изотопов

Эксперимент был неправильно истолкован, а затем и вообще предан забвению. Не следует упускать из виду, что то было самое начало истории исследования ДНК; лишь два года назад (в 1953 году) Д. Уотсон и Ф. Крик предложили свою двуспиральную модель ДНК. Кроме того, для доказательства присутствия в зараженных клетках РНК качественно нового типа требовались довольно сложные расчеты и некоторые новые допущения. Оглядываясь назад, мы можем сказать, что это был первый эксперимент, указывающий на существование РНК, которая является копией ДНК.

По нашему мнению, наблюдения, сделанные Волкином и Астраханом, потенциально были очень важными. И мы решили поставить опыт, позволяющий дать определенный ответ на следующий вопрос: содержится ли в бактериальных клетках, зараженных фагом Т2, рибонуклеиновая кислота, которая каким-то специфическим образом связана с ДНК вируса Т2?

Сначала мы попытались отделить новую РНК от остальных рибонуклеиновых кислот физическими методами и тем самым доказать ее существование. Мы с успехом использовали, во-первых, электрофорез, позволяющий разделять вещества благодаря разной скорости передвижения молекул в электрическом поле, и, во-вторых, центрифугирование в градиенте сахарозы — при этом разделение достигается за счет разной скорости осаждения молекул при центрифугировании в растворе постепенно меняющейся плотности. Оказалось, что РНК, синтезированная после заражения вирусом, действительно отличается от основной клеточной РНК по размерам молекул и их подвижности.

Мы обнаружили также, что отношение оснований (А, У, Г и Ц) в этой Т2-специфичной РНК отражает отношение оснований (А, Т, Г и Ц) в ДНК вируса. Это наводило на мысль о том, что сходство может простираться вплоть до полного соответствия в последовательности оснований. Прямой ответ на вопрос путем выяснения всей последовательности оснований в РНК и ДНК был — и остается — слишком трудным.

Как раз в это время две группы исследователей независимо друг от друга показали, что с помощью нагревания можно разделить двухцепочечную ДНК на отдельные цепи (такой процесс называется денатурацией), а затем, медленно охлаждая смесь, вновь заставить цепи соединиться, так что двухцепочечная структура ДНК восстанавливается (смотрите рисунок ниже).

Гибридизация

Гибридизация

Гибридизация происходит тогда, когда последовательности оснований в цепи РНК и одноцепочечной
(денатурированной) ДНК комплементарны друг другу. В данном случае PHK-I смешали
с генетически близкой ДНК-I и чужеродной ДНК-II. Гибридизуются только генетически родственные цепи. 

Этими исследователями были Д. Мармур и Дороти Лейн, а также П. Доти со своими сотрудниками. Они установили, далее, что восстановление двухцепочечной структуры происходит только в том случае, если взаимодействуют цепи ДНК из одних и тех же или из очень близких организмов.


«Молекулы и клетки», под ред. Г.М.Франка





Читайте далее: