Главная / Молекулы и клетки / Гибридные нуклеиновые кислоты / Устранение загрязнения меченой информационной РНК

Устранение загрязнения меченой информационной РНК

18.09.2015г.

Загрязнение меченой информационной РНК мы устранили весьма просто: пометив клеточную РНК, мы переносили клетки на нерадиоактивную среду и оставляли их там на определенный, довольно длительный период; за это время меченая информационная РНК успевает разрушиться, тогда как более устойчивая рибосомная РНК сохраняет метку. Наконец, избавиться от всех неспецифических агрегатов, образовавшихся за счет механического сцепления или случайного спаривания на протяжении коротких участков, нам помогла обработка рибонуклеазой. В истинном гибриде РНК ферментом не разрушается.

Мы уже говорили о том, что в рибосомах содержится два вида РНК — так называемые 23S-PHK и 16S-PHK. На рисунке ниже представлены результаты опытов по гибридизации между 23S-PHK из кишечной палочки и тремя различными препаратами ДНК.


Опыты по гибридизации рибосомной РНК

Опыты по гибридизации рибосомной РНК
 

Опыты по гибридизации рибосомной РНК показывают, что эта РНК, подобно информационной, также образуется на ДНК-матрице. В этом опыте рибосомную 23S-PHK получили из кишечной палочки (Escherichia coli). При смешивании этой РНК с одноцепочечной ДНК фагов Т2 и Т5 гибриды не образуются (А и Б). Если же смешать РНК с ДНК Е. coli, то гибриды возникают (В). Объем фракции 1 миллилитр. I — РНК Escherichia coli; IIДНК из различных источников (А — ДНК фага Т2; Б — ДНК фага Т5; В — ДНК Е. coli).


Устойчивая к действию рибонуклеазы структура появляется только тогда, когда ДНК и рибосомная РНК взяты из одного организма. Следовательно, не остается сомнений в том, что рибосомная РНК синтезируется на матрице ДНК.

Продолжая наши исследования, мы получили ответ на вопрос о том, какая часть молекулы ДНК участвует в синтезе рибосомной РНК. С этой целью мы просто добавляли к определенному количеству ДНК все возрастающие количества рибосомной РНК и находили отношение РНК/ДНК в гибриде при насыщении.

На рисунке ниже приведены результаты опыта с рибосомной РНК из Bacillus megaterium.


Кривые насыщения

Кривые насыщения

Кривые насыщения показывают, какая часть молекулы ДНК служит матрицей для синтеза 16S-PHK и 23S-PHK. Препараты РНК и ДНК выделены из Bacillus megaterium. Как видно из результатов опыта, около 0,14% молекулы ДНК комплементарно 16S-PHK и около 0,18% ДНК комплементарно 23S-PHK. I — 23S-PHK, II16S-PHK. На оси ординат — гибрид РНК и ДНК (число микрограммов РНК на 100 микрограммов ДНК). Объем фракции 1 миллилитр.


Ясно, что около 0,18% всей молекулы ДНК комплементарно 23S-PHK и примерно 0,14% комплементарно 16S-PHK.

Такое различие говорит о том, что 23S-PHK и 16S-PHK — это, по-видимому, разные виды молекул, однако здесь не следует спешить с выводами. Различаясь по молекулярному весу, эти два вида рибосомной РНК очень близки по составу оснований (что касается последовательности оснований, то мы пока не располагаем прямыми методами ее определения). Во всяком случае, сходство в составе оснований и тот факт, что 23S-PHK почти вдвое тяжелее 16S-PHK, вызвали к жизни гипотезу, что молекула 23S-PHK состоит из двух молекул 16S-PHK.


«Молекулы и клетки», под ред. Г.М.Франка





Читайте далее: