Определение лН стафилококкового токсина

28.10.2010г.

Лимитом гемолитического действия стафилококкового токсина (лН токсина) считается то его количество, которое дает полный (+ + + +) гемолиз (кроличьих эритроцитов, будучи связанным с 1 АЕ стафилококкового антитоксина. Для определения лН стафилококового токсина его вносят в пробирочный ряд в восходящих количествах — 0,08, 0,1, 0,12, 0,15, 0,18, 0,2, 0,22, 0,24, 0,25, 0,28, 0,3, 0,32, 0,35 и доводят объем до 1 мл физраствором химически чистой поваренной соли.

Стандартную антистафилококковую сыворотку разводят до 1 АЕ в 1 мл и по 0,1 мл добавляют в каждую пробирку. Смесь встряхивается и в каждую пробирку вносят по одной капле (0,05 мл) эритроцитов кролика (разведенных из расчета 1 мл отмытых эритроцитов +2 мл физиологического раствора).

В одну пробирку для контроля наливают 2 мл физиологического раствора и вносят одну каплю тех же эритроцитов. Пробирки на 1 час ставят в термостат при 37°, а затем на 1 час оставляют при комнатной температуре и учитывают результат.

За лН токсина принимается наименьшая доза токсина, дающая в смеси с 1 АЕ сыворотки гемолиз на три креста.

Определение энтеротоксика

Изучаемый штамм выращивают в чашке на 0,75%ном агаре с 0,25% глюкозы при рН — 7,0. Посевы помещают в эксикатор с 20% углекислоты, выращивают в течение одних суток при 37°. Потом агар измельчают, настаивают 2 часа в 10 мл физиологического раствора. 

Экстракт центрифугируют при 3000 оборотах (10—15 минут); верхний слой — прозрачную жидкость, содержащую энтеротоксин, в количестве 0,5— 1,0 мл вводят внутрибрюшинно мышам. При наличии энтеротоксин а животные гибнут в течение двух дней.

Полученный прозрачный центрифугат можно прогреть 30 минут в кипящей водяной бане и без анестезии ввести кошке в бедренную вену или вену уха в количестве 0,5 мл на 1 кг веса.

Возникновение рвоты и поноса или одной рвоты (в сроки от 30 минут до 3 часов) указывает на наличие энтеротоксина.

«Бактериологическая диагностика и профилактика стафилококковых заболеваний»,
Н.Р.Иванов, Л.М.Скитева, Н.С.Солун



Читайте далее: