Методика определения стафилококкового антитоксина

29.10.2010г.

Перенесенные стафилококковые заболевания, носительство (стафилококков, иммунизация препаратами, содержащими стафилококковые антигены, вызывают в организме человека и животных образование специфических антител, одним из которых является (стафилококковый антитоксин. Стафилококковый антитоксин нейтрализует гемолитические и некоторые другие свойства стафилококкового токсина.

Для установления наличия специфического антитоксина в иммунной сыворотке (для определения титра) пользуются способностью стафилококкового антитоксина нейтрализовать гемолитическое действие стафилококкового токсина.

Определение «нормального» антитоксина и титрование сывороток, содержащих менее 1 АЕ в 1,0 мл

Точно устанавливают лН стафилококкового токсина. Испытуемую сыворотку инактивируют при 56°С 20 минут, разводят в пять раз физиологическим раствором хлористого натрия. Готовят в соответствующих .количествах четыре разведения стафилококкового токсина лН/5, лН/10, лН/20, лН/40; например, если лН токсина=0,2, то лН/5 = 0,2: 5 = 0,04.

Остальные разведения готовят путем последовательных двукратных разведений токсина. Разведенную сыворотку разливают по 1 мл в пять пробирок. В первые четыре пробирки вносят по 1 мл одного из указанных разведений токсина, в пятую (контрольную) добавляют 1 мл физиологического раствора, в шестую — 2 мл физиологического раствора. Затем во все пробирки добавляют по одной капле (0,05 мл) трижды промытых кроличьих эритроцитов, разведенных физиологическим раствором в пропорции 1 : 3.

Смесь встряхивают, пробирки помещают в термостат при 37° на 1 час и еще один час выдерживают при комнатной температуре, а затем учитывают результаты.

За титр разведенной сыворотки принимается то количество сыворотки, в смеси с которой минимальное количество токсина дает слабый гемолиз ( + + или+) либо не дает гемолиза. Чтобы определить титр неразведенной сыворотки, нужно полученную величину умножить на степень разведения. 

Например, если 1 мл разведенной в пять раз сыворотки нейтрализовал лН/40 токсина, то титр ее= 1п =0,125 АЕ.

При отсутствии нейтрализации во всех разведениях испытуемая сыворотка содержит меньше 0,125 АЕ в 1 мл.

«Бактериологическая диагностика и профилактика стафилококковых заболеваний»,
Н.Р.Иванов, Л.М.Скитева, Н.С.Солун



Читайте далее: