Бактериологическое исследование на патогенный стафилококк (Второй этап)

29.10.2010г.

Второй этап

Через 18—20 часов инкубации просматривают посевы на чашках. В положительных случаях отмечают колонии, характерные для стафилококков: на кровяном агаре — крупные с ровными краями и зоной гемолиза. Если через 24 часа на чашках с кровяным агаром гемолиз не появляется, следует оставить их еще на 24 часа при комнатной температуре.

При отсутствии гемолиза делают повторный пересев на кровяной агар, чашку с посевом помещают в эксикатор с содержанием 20% углекислоты и ставят в термостат при 37°. Через 24 часа роста в атмосфере углекислоты утраченные гемолизирующие свойства восстанавливаются. Для образования углекислоты на дно эксикатора (1—2 л объема) помещают чашку с двууглекислой содой (1—2 г) и через оставленное отверстие тонкой пипеткой наливают 16—18 мл 10% соляной кислоты.

На чашках с желточно-солевым агаром патогенные стафилококки вырастают с образованием зоны помутнения вокруг колонии в результате наличия лецитовителазной реакции.

Подозрительные колонии (не менее трех) отвевают на скошенный агар для выделения чистой культуры, готовят препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют. 

При обнаружении мелких грамположительных кокков культуру отсевают на молочно-солевой агар для изучения пигментообразования и выделения (золотистых, палевых, лимонно-желтых, белых и т. д.) 3—5 колоний для высева на среды Гисеа, постановки реакции плазмокоагуляции и дальнейшей идентификации. Посевы на молочно-солевом агаре после инкубации при 37й следует 48 часов выдерживать при комнатной температуре, так как повышенное содержание поваренной соли в данной среде часто оказывает задерживающее влияние не только на сопутствующую микрофлору, но и на рост стафилококков.

Независимо от наличия на плотных средах подозрительных на стафилококк колоний, со среды обогащения производят высевы на чашки Петри с кровяным и желточно-солевым агаром. Посевы выращивают при 37°С 18—20 часов. При отсутствии роста через 24 часа вторично производят высевы на желточно-солевой и кровяной агар.

Некоторые авторы для изучения морфологии рекомендуют производить посевы культуры на сахарный бульон (с 1 % глюкозы); посев помещают на 5 часов в термостат при 37°, а затем готовят мазки. В мазках, окрашенных по Граму, обычно видны мелкие кокки, расположенные гроздевидно.

Идентификацию выделенной культуры начинают через 18—20 часов от начала исследования. При этом изучают: морфологию клеток в мазках, окрашенных по Граму; коагулазную, лецитиназную, гемолитическую активность; принадлежность к фаготипу; определяют чувствительность стафилококка к антибиотикам методом стандартных дисков. Изучение свойств перечисленных признаков позволяет провести идентификацию в случаях выделения типичного патогенного стафилококка.


«Бактериологическая диагностика и профилактика стафилококковых заболеваний»,
Н.Р.Иванов, Л.М.Скитева, Н.С.Солун



Читайте далее: