Лабораторная идентификация гонококков

07.05.2010г.

Бактериологический метод диагностики предусматривает выделение чистой культуры возбудителя и его идентификацию. Метод выделения гонококка основан на использовании способности возбудителя к внутриклеточному паразитированию. Способность нейссерий нейтрализовать лизоцим, добавленный в питательную среду, послужила основой для идентификации этих микроорганизмов на межвидовом уровне.

Этапами бактериологической диагностики гонореи являются культивирование исследуемого материала, родовая идентификация нейссерий по характеру роста колоний, определение антилизоцимного признака, выделение чистой культуры, видовая идентификация гонококков (микроскопия, определение лиоцимной и биохимической активности).

Технология исследования для идентификации гонококка разработана фирмой Pharmacia Diagnostics (Fadebact), Uppsala (1975).

Комплекс тестов предусматривает бактериоскопию с окраской по Граму, культуральные исследования, оксидазный тест, подтверждающие исследования (тесты утилизации углеводов, иммунофлюоресцентный тест, тест коагглютинации). Для культивирования гонококков используются селективные среды, содержащие ванкомицин, триметоприм, нистатин, колестин, ингибирующие рост микроорганизмов, исключая гонококки.

Колонии, подозрительные на гонококки, подвергаются оксидазному тесту: капля оксидазного реагента (1% раствор диметилфенилендиамина гидрохлорида), нанесенная на колонии гонококков, в течение 1 мин окрашивает их в розоватый цвет, а затем в темно-пурпурный.

Нужно учитывать, что грамотрицательные гонококки могут стать и грамположительными, если материал для исследования хранится более 48 ч. Колонии, растущие на гонококковой среде (селективной), с типичной морфологической характеристикой (серовато-беловатого цвета, блестящие, конвекс, с нечеткими краями), положительным оксидазным тестом, грамотрицательными диплококками предварительно идентифицируются как гонококки.

Однако для того, чтобы отдифференцировать гонококк от менингококка, необходимы подтверждающие тесты — тест утилизации Сахаров, тесты флюоресцирующих антител, коагглютинационные тесты.

Тест утилизации углеводов сводится к следующему: колония, предварительно идентифицированная как гонококк, помещается в пробирки, содержащие 1 % раствор глюкозы, мальтозы или сахарозы. Индикатором является фенол красный, включенный в среду. Гонококк дает положительную реакцию только на глюкозу.

При ферментации глюкозы выделяется кислота с окрашиванием среды в желтый цвет. Для достоверного выполнения теста необходима инкубация в течение 18 — 24 ч при температуре 35-37 °С с высокой влажностью и содержанием 3 — 10% СО₂. Тест флюоресцирующих антител.

Колонии, предварительно идентифицированные как гонококки, смешивают с флюоресцирующими антителами (конъюгатами), инкубируют 10 — 30 мин при температуре 37 °С, промывают дважды в фосфатзабуференной соли, прополаскивают в дистиллированной воде, высушивают на воздухе, препарат покрывают глицерином, исследуют в люминесцентном микроскопе.

«Болезни передающиеся при половых контактах»,
Ю.К.Скрипкин

Читайте далее: