В качестве антигена применяют взвесь бледных трепонем из раннего орхита кролика, зараженного сифилисом, обычно штаммом Никольса. Для заражения следует брать совершенно здоровых кроликов-самцов массой 2 — 2,5 кг, предварительно исследовав у них кровь на реакцию Вассермана.
Годятся только кролики с отрицательными результатами серологических реакций. Заражение производят внутрь яичка взвесью трепонем в количестве не менее 50 — 60 особей в поле зрения в объеме 0,50 — 0,75 мл. Непосредственно после заражения кролику вводят внутримышечно 20 мг кортизона, а в последующие дни — по 10 мг ежедневно.
Рекомендуемое рядом исследователей одновременное облучение кроликов рентгеновскими лучами трудно для выполнения и не имеет существенных преимуществ. Для удаления яичка кролика (при 6 — 8-дневном орхите) привязывают к станку, обескровливают сердечной пункцией (некоторые предпочитают обескровливать через сонную артерию).
Затем забивают кролика воздушной эмболией (введение 15 см3 воздуха в краевую вену уха). Яички выводят в мошонку путем поглаживания ладонью по животу кролика сверху вниз.
Поверхность кожи мошонки, предварительно немного подстриженной ножницами, смазывают спиртом, зажигают, тут же тушат и опять зажигают. Этим достигаются освобождение кожи от шерсти и одновременно дезинфекция кожи. После этого мошонку покрывают резиновой стерильной салфеткой с разрезом, через который выводят наружу яичко.
Оператор фиксирует яичко левой рукой, а правой рукой делает скальпелем небольшой поперечный разрез кожи мошонки. Ножницами отрезают яичко от подлежащих тканей и помещают его в стерильную чашку Петри. Такого же рода манипуляцию проделывают и с другим яичком. Далее ножницами удаляют придаток, освобождают яичко от жира и разрезают его на 10 — 15 кусочков.
Готовят препарат с каплей изотонического раствора натрия хлорида и определяют под микроскопом в темном поле наличие трепонем и их число. Все кусочки помещают в стерильную колбочку Эрмленмейера объемом 50 — 75 мл, в которую уже налита среда (сыворотка кролика, разведенная 0,83 % стерильным раствором натрия хлорида в количестве 10 — 14 мл на яичко).
Колбу ставят в аппарат для встряхивания на 20 — 30 мин. После этого все содержимое выливают в большую стерильную центрифужную пробирку и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин для удаления плотных кусочков тканей. Затем надосадочную жидкость сливают и готовят препараты для микроскопии. Определяют число трепонем в темном поле зрения (окуляр 10, объектив 40).
Если число трепонем большое, то взвесь следует развести, чтобы было по 10 — 15 трепонем в поле зрения, так как при большем их числе трудно подсчитывать иммобилизованные трепонемы. Обычно в центрифужной пробирке над осадком оставляют некоторое количество жидкости и дают возможность немного ей постоять. Жидкостью, содержащей большое число трепонем, заражают кроликов для следующей постановки реакции.
При каждой постановке следует одновременно производить и заражение. Зараженных кроликов содержат в клетках в проветриваемом помещении при температуре -f-1820 °С. Пища кроликов должна содержать значительное количество витаминов.
«Болезни передающиеся при половых контактах»,
Ю.К.Скрипкин