Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИП)

РИП основана на том, что вирулентные тканевые трепонемы, сенсибилизированные сывороткой больного сифилисом, в присутствии комплемента и эритроцитов прилипают к поверхности эритроцитов и при центрифугировании увлекаются с ними в осадок, исчезая из надосадочной жидкости. 

Приводится по методическим рекомендациям, составленным Г. П. Авдеевой (Узбекский научно-исследовательский кожно-венерологический институт). Перед началом работы, связанной с приготовлением антигена из бледных трепонем, в кастрюлю объемом 2 — 3 л наливают на 2/3 дистиллированной воды и в процессе работы складывают в нее колбы, пробирки, пипетки, предметные стекла, загрязненные антигеном. Готовят также почкообразный тазик, заливаемый на 2/3 дистиллированной водой, куда складывают покровные стекла после работы. 

Приготовление препарата для подсчета бледных трепонем необходимо проводить с максимальной точностью, так как при неточном разливе ингредиентов, при избытке или недостатке исследуемого материала в препарате могут получиться недостоверные результаты. 

Учет результатов следует проводить в день постановки реакции, лучше всего тут же после центрифугирования, так как при длительном стоянии пробирок (15 — 24 ч) могут появляться ложноположительные результаты. Покровные стекла по размеру должны быть только 24*24 мм. Надосадочную жидкость берут микропипеткой объемом 0,1 мл. 

Для постановки реакции используются следующие ингредиенты: испытуемая сыворотка, антиген, комплемент, эритроциты донора, изотонический раствор натрия хлорида. Кровь берут из вены и обрабатывают, как для реакции Вассермана. 

Сыворотку крови инактивируют в водяной бане при температуре 55 — 56 °С в течение 30 мин. В качестве антигена используют взвесь бледных трепонем штамма Никольса. Здоровым кроликам интратестикулярно вводят по 0,75 — 1 мл взвеси бледных трепонем, содержащей не менее 60 — 70 особей в поле зрения. 

На 7 — 12-й день кролика забивают воздушной эмболией, вводя 20 см3 воздуха в ушную вену. Яички удаляют, очищают от оболочек, жира, освобождают от придатков и разрезают на мелкие кусочки, которые затем помещают в стерильную колбу, заливают 10 — 15 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. После этого всю жидкость из колбы отсасывают пипеткой в пробирку и определяют в ней число бледных трепонем. Для этого микропипеткой из пробирки наливают 0,01 мл на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и смотрят в темном поле зрения. 

Если число бледных трепонем в поле зрения достигает 100, го в колбу с тканями яичка добавляют 50 мл, а если 50, то 20 — 25 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида и производят встряхивание в шюттель-аппарате в течение 50 мин. Первую порцию взвеси бледных трепонем уничтожают (она не может быть использована в качестве антигена). Вторую порцию жидкости, полученную при экстрагировании, отсасывают стерильной пипеткой, разливают в химические пробирки и снова определяют в ней число бледных трепонем в поле зрения. 

При наличии в этой порции жидкости 50 — 100 бледных трепонем яички можно подвергать повторным экстрагированиям с новыми порциями изотонического раствора натрия хлорида до тех пор, пока в антигене не будет не менее 20 бледных трепонем в поле зрения. После каждого экстрагирования жидкость из колбочки отсасывают пипеткой в стерильные химические пробирки и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 15 мин. 

Надосадочную жидкость отсасывают (или сливают) из всех пробирок в одну стерильную колбочку, прогревают при температуре 56 °С в течение 30 мин, и в ней определяют число бледных трепонем в темном поле зрения, просматривая 10 полей зрения. 

Ампулирование производят сразу или на 2 — 3-й день после приготовления антигена. На ампулах с антигеном обозначают серию антигена, дату его изготовления и среднее число бледных трепонем в одном поле зрения. Перед каждой постановкой РИП необходимо определять количество бледных трепонем в антигене. Рабочий антиген должен содержать 15 — 20 бледных трепонем в поле зрения. 

Антиген применяется в дозе 0,3 мл для каждой испытуемой сыворотки. Расчет необходимого количества антигена делается в день постановки реакции. Например, для исследования 50 сывороток крови нужно 0,3 * 55, что в результате дает 16,5 мл рабочего антигена (поскольку необходимо взять на 5 пробирок больше с учетом контролей и случайных потерь). 

Комплемент растворяют согласно указанию на этикетке, вводят в дозе 0,05 мл в опыт. Так, для исследования 50 сывороток крови необходимо 0,05 мл * 55, в результате получится 2,75 мл комплемента. 

Взвесь эритроцитов готовят так: применяется только цитратная кровь донора 0 (1) группы, которую взбалтывают до получения однородной смеси, наливают в центрифужные пробирки и трижды отмывают изотоническим раствором натрия хлорида. Надосадочная жидкость должна быть прозрачной и негемолизированной. Из осадка отмытых эритроцитов готовят 50 % взвесь их в изотоническом растворе натрия хлорида, которую наливают в пробирки в дозе 0,1 мл для каждой испытуемой сыворотки. 

Расчет необходимого количества эритроцитов для 50 сывороток производят следующим образом: 0,1 мл * 55, получается 5,5 мл (в данном случае 3 мл отмытых эритроцитов и 3 мл изотонического раствора).

«Болезни передающиеся при половых контактах»,
Ю.К.Скрипкин

• Реакции иммунофлюоресценции (антиген)
• Реакции иммунофлюоресценции (техника постановки реакции)
• Реакция иммобилизации бледных трепонем
• Реакция иммобилизации бледных трепонем (антиген)
• Реакция иммобилизации бледных трепонем (среда сохранения трепонем)
• Ошибки в диагностике сифилиса
• Реакция иммобилизации бледных трепонем (техника постановки реакции)
• Ошибки в диагностике сифилиса (частные случаи)
• Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (техника постановки)
• Ошибки в диагностике сифилиса (ошибки терапевтов)
• Реакция гемагглютинации с бледными трепонемами (ТРПГА)
• Ошибки в диагностике сифилиса (симптоматика ранних сифилитических поражений)
• Клиническая оценка серологических реакций
• Серологическая диагностика сифилиса
• Клиническая оценка серологических реакций (постановка диагноза)
• Серологическая диагностика сифилиса (реакция Вассермана)
• Исследование спинномозговой жидкости
• Серологическая диагностика сифилиса (реакция Колмера)