Биохимический анализ мышечной ткани

24.08.2011г.

Химический анализ мышечной ткани имеет большое значение для расшифровки патогенеза нервно-мышечных заболеваний, однако сравнительно редко используется для целей диагностики. Причины этого заключаются в отсутствии на сегодняшний день реальных представлений о молекулярной сущности заболевания в каждом конкретном случае. 

Исключение составляют лишь немногие миопатии, для которых первичный эффект мутантного гена известен (например, карнитиновая). В большинстве случаев широкий набор биохимических тестов может быть использован не столько для выявления конкретной формы заболевания, сколько для разрешения таких кардинальных вопросов, как разделение первичных и вторичных амиотрофий. 

Так, снижение активности фосфорилазы (за счет выпадения А-формы) характерно для большей части нервно-мышечных заболеваний. Однако у больных миодистрофией Дюшенна уже на ранних стадиях заболевания активность фермента составляет 20 — 50% нормы, в то время как в случае плечелопаточно-лицевого варианта ПМД и спинальных амиотрофий редко снижается ниже 50% [Salvatore D. et al., 1967, 1971]. В далеко зашедших стадиях заболеваний отличия нивелируются. 

Определение активности КФК в мышечной ткани также имеет диагностическое значение, являясь негативным отражением изменения активности фермента в сыворотке крови. Правда, при этом зависимость активности ферментов от возраста и пола частично нивелируется. Согласно данным Silverman L. и соавт. (1976) в начальных стадиях заболевания определенное значение для выявления ПМД имеет идентификация мозгового типа фермента (ВВ). Если у больных с псевдогипертрофической формой Дюшенна активность этой формы была зарегистрирована в 92% случаев, то при невральных амиотрофиях не более чем в 20%. 

Важный вклад в разработку принципиально новых тестов исследования мышечной ткани, предназначенных для разграничения отдельных форм миодистрофий, внесли работы V. Jonasescu и соавт. (1971, 1973, 1975). В основу метода положено определение белково-синтетической способности полирибосомного комплекса. 

Оценка полученных результатов проводилась на основании анализа трех параметров: скорости синтеза саркоплазматических белков, коллагена, оценки профиля полисом. Характерным признаком миодистрофии Дюшенна явилось резкое увеличение интенсивности включения аминокислот во фракцию коллагена на фоне сохранного профиля полисом. При форме Беккера было отмечено снижение количества рибосом. 

Характерной особенностью аутосомно наследуемых миодистрофий явилось избирательное увеличение скорости синтеза саркоплазматических белков. Несмотря на то что выявленные особенности позволяют разграничить отдельные формы ПМД, предложенный метод широкого распространения не получил. Это обусловлено в основном техническими трудностями, плохой воспроизводимостью способа, необходимостью использования большого количества биопсийного материала (около 1 г). 

В 1973 г. Е. С. Бондаренко предложил дифференцировать нервно-мышечные заболевания по степени изменения содержания ДНК и соотношения нуклеотидов. У больных миодистрофией Дюшенна был зарегистрирован низкий уровень полинуклеотида, при форме Эрба он оставался без существенных изменений, а в случае спинальной амиотрофии Кугельберга — Веландер превышал норму в 2 — 3 раза. 

В 1978 г. А. П. Хохлов и В. К. Малаховский разработали простой тест для выявления отдельных форм нервно-мышечных заболеваний, требующий минимального количества материала (в пределах 10 мг). Сущность заключается в определении константы диссоциации комплекса цАМФ — протеинкиназа. 

Величина этого параметра, в норме составляющая 5,5 ± 0,5 * 10—8 М, изменяется при нервно-мышечных заболеваниях следующим образом: при миодистрофии Дюшенна 5,2 ± 0,56 М, при юношеской форме Эрба 0,54 ± 0,08 М, при плечелопаточно-лицевой форме Ландузи — Дежерина 0,45 ± 0,16 М, при спинальной амиотрофии Кугельберга — Веландер 1,05 ± 0,2 М, при невральной амиотрофии Шарко — Мари 2,2 ± 0,3 М и т. д.; это позволяет достоверно дифференцировать Х-сцепленные, аутосомные и неврогенные миопатии. Важным преимуществом данного теста является отсутствие зависимости величины Кдис от пола, возраста, стадии, темпа развития заболевания. 

Изложенный литературный материал указывает на перспективность использования биохимического анализа мышечной ткани для диагностических целей. Химические методы исследования имеют преимущество перед морфологическими, так как уровень биохимических сдвигов в подавляющем большинстве случаев не зависит от степени повреждения мышечной ткани и остается неизменным как в преклинической, так и в терминальной стадии заболевания. 

Открытие первичного продукта мутантного гена сделает возможным проведение специфической диагностики нервно-мышечных заболеваний задолго до формирования клинической картины заболевания.

«Нервно-мышечные болезни»,
Б.М.Гехт, Н.А.Ильина





Читайте далее: