Изучение влияния концентрации тирозина на стабильность гидролизата

04.10.2010г.

В разработанном в Ленинградском НИИ гематологии и переливания крови на основе глубокого солянокислого гидролиза белков крови человека и животных препарате — инфузамине — концентрация свободных аминокислот составляет 45 — 50 г/л, превышая соответствующий показатель для гидролизина и аминокровина более чем в два раза. 

При этом уровень тирозина, который из-за плохой растворимости не включают в состав препаратов синтетических аминокислот, возрастает в среднем с 40 мг.% в растворе гидролизина до 120 мг. что в 2,5 раза выше значения его растворимости. 

Задачей настоящей работы явилось выявление роли тирозина в формировании осадков в инфузамине, а также определение путей повышения стабильности препаратов гидролизованного белка с высокой концентрацией свободных аминокислот. 

Изучение влияния концентрации тирозина на стабильность гидролизата проводили на стадии ионного обмена процесса получения инфузамина. 

Для этого кислый гидролизат белка пропускали последовательно через колонки с анионитом ЭДЭ-ЮП (800 г смолы) и катионитом КРС-20П (200 г смолы), собирали фракции элюата объемом 200 мл каждая и с целью провокации осадков выдерживали их при температуре (+4) — (+8°С) в течение 24 часов. 

Во фракциях до и после выпадения осадка определяли содержание общего азота полумикрометодом Кьельдаля, аминный азот — методом Зеренсена с применением нотенциометрического титрования, тирогзина — методом Фолина, концентрацию ионов натрия и калия — методом пламенной фотометрии, содержание хлоридионов — методом Мора, рН — потенциометрически.

Динамика изменения общего азота и тирозина

Динамика изменения общего азота и тирозина

Динамика изменения общего азота и тирозина во фракция элюата в процессе ионообменной очистки инфузамина:
— ● — общий азот до выпадения осадка;
— ○ — общий азот после выпадения осадка;
— ■ — тирозин до выпадения осадка;
— □ — тирозин после выпадения осадка;
— X — рН до выпадения осадка. 

На рисунке представлены результаты пофракциопного анализа элюата в процессе ионообменной очистки гидролизата. 

Как видно из данного рисунка, осадок формируется во фракциях с высоким содержанием общего азота (800 — 1200 мг.%) в интервале рН от 4 до 7 (фракции № 14 — 21). При этом не отмечалось прямой зависимости между интенсивностью выпадения из раствора осадка и содержанием общего азота. Так, во фракции № 13 с наибольшей концентрацией азота (1200 мг.%) осадка не наблюдалось, в то же время он был максимальным во фракции № 16, где содержание азота составляло 1100 мг.%.

«Гемокомпонентная инфузионная терапия
и парентеральное питание»,
H.A.Горская, H.П.Сивакова





Читайте далее: